Logo no.boatexistence.com

Hvorfor må kompetente celler holdes på is?

Innholdsfortegnelse:

Hvorfor må kompetente celler holdes på is?
Hvorfor må kompetente celler holdes på is?

Video: Hvorfor må kompetente celler holdes på is?

Video: Hvorfor må kompetente celler holdes på is?
Video: Hvorfor skal alle mink dø? 2024, Kan
Anonim

Hold dem KALDE! Prosessen med å lage kompetente celler er utfordrende på grunn av behovet for at cellene skal holde seg kalde. Dette er avgjørende fordi cellene er så følsomme og skjøre mens de blir gjort kompetente Å holde temperaturen lav bidrar til å unngå celledød under behandlingen.

Hvorfor holdes reaksjonene på is under transformasjonseksperimentet?

Plasmid-celleblandingen varmes deretter kort opp til 45–50°C, slik at DNA kan komme inn i cellen gjennom den ødelagte membranen. Den oppvarmede blandingen legges deretter tilbake på is for å beholde plasmidene inne i bakteriene … Hvis plasmid-DNA-løsningen har for mye s alt i seg, kan det oppstå buedannelse, noe som kompromitterer transformasjonen.

Hvorfor legger du rørene på is?

Hvorfor tror du vi legger rørene på is? For å få DNA inn i bakteriene, må vi stikke hull i dem med det kjemiske stoffet kalsiumklorid (CaCl2). … Hullene som er stukket for å slippe inn DNA gjør at bakteriene lekker. Hvis vi ikke holder dem på is, vil de "blø" i hjel.

Hva er rollen til iskaldt kalsiumklorid i fremstillingen av kompetente celler?

Prosessen med varmesjokktransformasjon av kalsiumklorid oppmuntrer bakterieceller til å ta opp DNA fra omgivelsene. … Den iskalde CaCl2-løsningen letter binding av DNA til overflaten av cellen, som deretter kommer inn i cellen etter en kort periode med varmesjokk (3).

Hvordan lagrer du kompetente celler?

Kompetente celler bør lagres ved - 80°C. Lagring ved -20°C vil resultere i en betydelig reduksjon i transformasjonseffektivitet (TE). Når de ble testet på NEB 5-alpha Competent E. coli (NEB C2987H), mistet cellene 94,5 % av TE etter bare 24 timers lagring ved -20°C.

Anbefalt: