Vortexing vil ikke skjære RNA for å gjøre det ubrukelig hvis du gjør tilfeldig priming RT - bare hvis du ønsker å klone langt mRNA. Invitrogen teknisk støtte er også korrekt. Kloroform er tyngre enn Trizol og vil synke til bunnen av røret.
Er det trygt å virvle RNA?
Ikke vortex Trizol-lysater eller RNA-prøver for å unngå skjæring. Etter ekstraksjon, hold RNA-prøver på is til enhver tid. Denne protokollen er utformet for prøver lysert 1mL Trizol i et 1,5 eller 2mL rør.
Kan du varme RNA?
Derfor, unngå høye temperaturer ( over +65°C) siden disse påvirker integriteten til RNA. I stedet, for å smelte ut sekundære strukturer, oppvarm RNA til +65°C i 15 minutter i nærvær av denaturerende buffere.
Hvordan resuspenderer du RNA-pellets?
resuspender pelleten med varmt vann (40-50 grader celsius). inkuber i 45 grader celsius i 10 minutter. legg dem i +4 i 4-6 timer.
Hvordan utfeller du RNA?
A.
Etter at s altkonsentrasjonen er justert, kan RNA utfelles ved å tilsette 2,5 volumer etanol eller 1 volum isopropanol og blande grundig, etterfulgt av avkjøling i minst 15 minutter ved -20°C.