Det følgende er en oversikt over de forskjellige trinnene i en indirekte immunfluorescensfargingsprotokoll
- Eksperimentplanlegging og prøveforberedelse. …
- Sample Fiksering. …
- Cellepermeabilisering. …
- Blokkering. …
- Primær antistoffinkubasjon. …
- sekundær antistoffinkubasjon. …
- Motbeis og montering.
Hvordan utfører du immunfluorescens?
Alle inkubasjonstrinn finner sted ved romtemperatur
- Vask cellene to ganger og bruk en pinsett til å plassere dekkglasset med oppovervendte celler forsiktig inn i det fuktede kammeret.
- Fiks med 4 % formaldehyd i 10 minutter og vask 3 ×.
- Permeabiliser med 0,1 % TX-100/PBS i 15–20 minutter og vask 3 ×.
Hvordan bruker du immunfluorescens i en celle?
Immunofluorescensprotokoll for adherente celler
- Frø 1–1,5 x104 celler per brønn i et 4-kammer objektglass i 500 mL kulturmedium. Inkuber ved 37 °C ved 5 % CO2.
- 32–36 timer etter cellesåding, fjern cellekulturmediet og skyll cellene 3 ganger med 500 µL 1X PBS.
Hva er et eksempel på immunfluorescens?
For eksempel kan en forsker lage primære antistoffer i en geit som gjenkjenner flere antigener, og deretter bruke fargestoffkoblede sekundære kaninantistoffer som gjenkjenner geiteantistoffets konstante region (" kanin anti-geit" antistoffer).
Hva er bruken av immunfluorescensfarging?
Immunofluorescens (IF)-farging er en mye brukt teknikk i biologisk forskning og klinisk diagnostikk IF bruker fluorescensmerkede antistoffer for å oppdage spesifikke målantigener. Etterfulgt av bildebehandling er det en veldig direkte teknikk ettersom du faktisk kan se noe.