Hvis proteinet ditt ikke har samme størrelse som antistoffet ditt, kan du eluere med 0,1M glycin, pH2-3 og deretter skille proteinet av interesse fra antistoffet ved hjelp av SEC (som superdex 200).
Hva eluerer et protein?
Proteinene elueres av en gradient av økende mengder av et organisk løsningsmiddel, slik som acetonitril. Proteinene eluerer i henhold til deres hydrofobisitet. Etter rensing ved HPLC er proteinet i en løsning som kun inneholder flyktige forbindelser, og som lett kan frysetørkes.
Hvorfor har proteiner en lav pH-eluering?
Bruken av lav pH-buffer for eluering fra protein A er kjent for å bidra til produktaggregering Likevel, et mer begrenset sett med bevis tyder på at lav pH kanskje ikke er den eneste årsak til aggregering i protein A-kromatografi, snarere kan andre fasetter av prosessen bidra betydelig.
Hvordan eluering gjøres?
I analytisk og organisk kjemi er eluering prosessen med å ekstrahere ett materiale fra et annet ved å vaske med et løsemiddel; som ved vasking av ladede ionebytterharpikser for å fjerne fangede ioner. … Etter at løsemiddelmolekylene har fortrengt analytten, kan analytten tas ut av kolonnen for analyse.
Hvor mange antistoffer trenger du for Coip?
For rutinemessige Co-IP-eksperimenter er antistoffet jeg brukte ikke mer enn 2ug (i settet mitt er 1,4 -2,0 ug antistoff tilstrekkelig for å fange 2500-5000 ug av proteinlysat.) Men det er fortsatt avhengig av ekspresjonsnivåene til målproteinene dine i prøvene dine, så du må sannsynligvis gjøre noen modifikasjoner.
